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獸用疫苗生產(chǎn)過程中,如何預防支原體污染?

更新時間:2023-10-14  |  點擊率:605

在獸用疫苗的生產(chǎn)過程中,尤其是細胞培養(yǎng)步驟中,很容易發(fā)生支原體污染,進而影響疫苗質(zhì)量,會給疫苗生產(chǎn)商或養(yǎng)殖戶帶來經(jīng)濟損失,同時也不利于畜禽疾病防控工作的順利開展。造成支原體污染的原因也較多,工作環(huán)境、培養(yǎng)基、被污染的細胞、試驗器材等都可能造成支原體的污染,從而使疫苗質(zhì)量下降,安全性及免疫效果難以達到標準。

 

在日常的清潔與環(huán)境污染物監(jiān)控過程中,應(yīng)時刻關(guān)注支原體污染情況。

 

日常清潔中,應(yīng)對實驗環(huán)境進行消殺,可采用消毒試劑,對試驗臺、地面、墻壁等表面進行擦拭,推薦使用支原體專用清除試劑——德國MB公司生產(chǎn)的Mycoplasma-off,即用型支原體祛除噴霧劑,直接將試劑噴灑在待清潔物表面即可,高效清除物體表面的支原體、真菌、細菌、等污染。

 

還應(yīng)定期對培養(yǎng)物進行取樣檢測,監(jiān)控培養(yǎng)物是否被支原體污染。PCR是一種很好的手段。根據(jù)支原體核糖體16s-23s rRNA的特異保守序列設(shè)計引物,對待檢樣本DNA進行擴增,通過對擴增產(chǎn)物的大小分析作出診斷。德國MB公司的支原體常規(guī)PCR檢測試劑盒,

①高特異性,一次檢測即可涵蓋了所有可能感染細胞的支原體物種(涵蓋歐洲藥典規(guī)定的9種支原體),根據(jù)序列一致性,至少可以檢測到107種支原體物種。操作簡單,易于觀察(使用MB的試劑盒,下表中列出的支原體物種均為陽性,其他微生物或真核細胞均為陰性,無交叉反應(yīng))。191bp為內(nèi)控對照條帶,表明PCR反應(yīng)正常。當樣本存在支原體污染時,由于內(nèi)控對照與支原體DNA存在競爭,內(nèi)控對照條帶變?nèi)酰ɡ缰гwDNA10^3拷貝)。

②高靈敏度,1-5拷貝/μl的支原體DNA即可檢出。

③試劑盒含內(nèi)控對照,可防止假陰性的發(fā)生。

④符合歐洲藥典要求。


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