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警惕!細胞培養(yǎng)中的支原體污染!

更新時間:2023-03-11  |  點擊率:746

細胞培養(yǎng)技術(shù),對于實驗環(huán)境的潔凈度有嚴格的要求。不僅要對細胞實驗用的基礎(chǔ)設(shè)施進行維護,還要定期對環(huán)境進行清潔,防止細胞被真菌、細菌、支原體等微生物污染。


我們反復(fù)強調(diào)要避免細胞的支原體污染。那么,支原體對于細胞培養(yǎng)而言,究竟有何種危害?本期內(nèi)容,為大家介紹支原體污染的危害。

支原體發(fā)現(xiàn)于1898年。自1956年Robinson從細胞培養(yǎng)物中分離出支原體后, 國內(nèi)外關(guān)于支原體污染細胞的報道便層出不窮。支原體廣泛存在于自然界中, 有80余種。


支原體 (Mycoplamsa) 又稱霉形體,歸屬于柔膜體綱 (Mollicutes) ,共有6個屬,120個種別。支原體沒有細胞壁,不能維持固定的形態(tài)而呈現(xiàn)多形性。


對支原體進行革蘭染色為陰性。不僅如此,支原體對青霉素這類干擾細胞壁合成的抗生素,具有天然抗性。


支原體通常附著在細胞的表面, 并影響其宿主細胞的生理、遺傳等多方面的正常功能, 用這些污染后貌似正常的細胞做試驗或生產(chǎn), 將會嚴重影響結(jié)果。


1、影響細胞的生長繁殖及形態(tài)


細胞培養(yǎng)物遭受到支原體污染后,會出現(xiàn)生長減慢,細胞病變等情況。


具體表現(xiàn)為以下幾點:


不僅如此,某些支原體還可在侵入細胞8小時內(nèi),使線粒體膨脹,繼而被破壞,細胞核呈空泡化,細胞微管解聚,培養(yǎng)瓶中細胞與細胞間隙出現(xiàn)膜狀沉積,細胞無法傳代,甚至整個細胞群體溶解。

2、代謝和功能


支原體污染細胞的情況,在形態(tài)上變化不明顯。但需要注意的是,細胞培養(yǎng)基的pH值,會有比較大的變化。更換培養(yǎng)液后幾小時就變酸,培養(yǎng)基中的必需氨基酸被消耗掉,進而改變細胞代謝。


支原體對細胞代謝和功能的影響,具體體現(xiàn)在以下幾個方面:


有研究表明,在單克隆抗體制備中,骨髓瘤或雜交瘤細胞因支原體的污染而導(dǎo)致融合失敗或抗體分泌能力下降以至喪失。


3

引起染色體異常


改變?nèi)旧w組型,通常可導(dǎo)致細胞染色體斷裂、數(shù)目減少,出現(xiàn)雙著絲點染色體、環(huán)狀染色體等。


4、影響免疫細胞產(chǎn)量


對于巨噬細胞的培養(yǎng)體系,支原體會抑制干擾素的合成和降低其活性,加大了繼發(fā)感染其他細菌和病毒的幾率。也有研究表明,支原體可以通過植物血凝素,干擾淋巴細胞的刺激和分化。


為了盡可能降低細胞污染支原體的風險,應(yīng)定期對實驗環(huán)境進行清潔。


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對于培養(yǎng)箱水槽、水浴鍋這類衛(wèi)生死角,也應(yīng)提高警惕。德國MB公司的水槽支原體預(yù)防試劑——Water Shield™,含表面活性劑、季銨鹽和絡(luò)合劑,不易揮發(fā),可持續(xù)作用4周,按1:200比例,直接加入水中,不含醛類或疊氮化物,對細胞無毒害,但能有效預(yù)防支原體、細菌、真菌、等微生物污染 。
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