葉酸測定培養(yǎng)基用法

　　

　　稱取本品9.4g,另稱取50mg抗壞血酸,加熱溶解于100ml蒸餾水中,分裝試管,每管5ml,使沉淀物分散均勻,加入標(biāo)準(zhǔn)品或測試樣品,用蒸餾水補(bǔ)體積至10ml,121℃高壓滅菌5分鐘,備用。

　　

　　正常人的血清葉酸水平正常為9.9ng/ml。在身體異常或得病時(shí)，葉酸水平會顯著變化。葉酸干酪培養(yǎng)基采用干酪乳桿菌（ATCC7469）為測定用菌，用于葉酸的微生物法測定。該培養(yǎng)基是基于Flynn等人(1)的配方，并經(jīng)Baker等人(2)和Waters、Mollin(3)改良。用于維生素測定的測定菌通常需要三種培養(yǎng)基：維持培養(yǎng)基、接種培養(yǎng)基和測定用培養(yǎng)基。后者通常是化學(xué)限定的培養(yǎng)基，包含所有測定菌生長所需的養(yǎng)分，但不含有待測的分子。類似的，葉酸干酪培養(yǎng)基包含干酪乳桿菌生長所需的所有成分，但不包含葉酸。因而，添加一系列濃度增加的葉酸，會觀察到干酪乳桿菌生長反應(yīng)的遞增。

　　

　　樣本葉酸濃度的測定步驟：如前所述使用0.5,1.0,1.5ml或其他體積的制備好的血清提取物。加入5ml葉酸干酪培養(yǎng)基和足量的蒸餾水，使每個(gè)試管的總體積為10ml。15磅121°C滅菌5分鐘。冷卻試管并向每個(gè)試管中加入一滴接種液。35-37℃孵育18-24小時(shí)后進(jìn)行濁度讀數(shù)。讀數(shù)前將試管冷藏15-30分鐘以停止細(xì)菌生長。620nm檢測吸光度。待測樣品中的葉酸含量應(yīng)根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線來確定，不過要考慮樣品稀釋度。

　　

　　葉酸測定培養(yǎng)基質(zhì)量控制

　　

　　Ø外觀——米黃色至黃色均一自由流動粉末

　　

　　Ø制備好的培養(yǎng)基顏色和透明度——淡琥珀色透明溶液，可能有輕微沉淀

　　

　　Ø配比濃度——在25°C下9.4%w/v(8.5g/100ml水）水溶液，pH值為6.7±0.1

　　

　　ØpH值——6.60-6.80